[미생물]실험에 필요한 기본 지식_배지 (medium)

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1. 배지 조제

미생물을 성장, 증식시키기 우해서는 탄소원, 질소원, 무기이온, 아미노산, 비타민과 발육 촉진인자등의 영양성분이 필요

미생물은 영양요구성이 균의 종류에 따라 각각 다름

배지 (medium)

미생물의 배양에 필요한 각종 영양분을 섞어 인위적으로 만든 혼합물

배지의 종류는 다양하나, 배지에 사용되는 소재, 배지의 형태, 배지 사용목적등에 따라 분류 가능

1.1. 소재에 의한 분류

천연배지 (natural medium), 복합배지 (complex medium) : 배지의소재가 천연물이며 그 화학조성이 확실히 알려있지 않은 배지. 미생물의 증식, 분리배양에 널리 쓰이고 있음

합성배지 (synthetic, defined medium) : 화학조성이 알려진 물질로 구성된 배지

1.2. 형태에 의한 분류

액체배지 (liquid medium, broth) : 미생물의 성장 검사, 증식, 대사산물을 목적으로 할 때 사용. 영양배지, peptone 배지, thioglycollate 배지, brain heart infusion  배지 등을 이용하며 액체배지는 미생물 수를 많이 증식시킴

고체배지 (solid medium) :액체배지에 한천 (agar)나 젤라틴 (gelatin)을 첨가하여 반고체배지 (semidolid medium) 또는 고체배지 (solid medium)을 만듬. 일반적으로 한천을 1.5% 정도 넣고 잘 저어가며 끓인 후 멸균하여 보관하고 배지 조제시 녹여서 사용. 열에 약한 혈액, 항생제, 당, 아미노산 등은 45~50'C에 맞추어 첨가혼합

반고체배지 (semisolid medium) : 반고체배지는 한천이나 젤라틴을 조금만 넣어서 고체가 덜 무른 상태의 배지. 한천을 0.35~0.5% 정도 넣어 만든 배지. 세균의 운동성 관찰하는데 이용

1.3. 배지 조제시 주의할 점

조성에따라 필요한 성분을 저울을 이용해 칭량 후 적당량의 물을 이용하여 용해

혼합할 때 혼합순서대로 혼합해야함. 순서가 바뀌거나 농도가 맞지 않으면 침전, 석출이 발생할 수 있음

배지를 담을 용기는 깨끗한 경질 유리 (pyrex)사용

미생물의 배양에는 pH가 중요하므로 pH 미터 (pH meter)를 이용하여 적당한 pH로 조정

pH조절에는 HCl, NaOH가 대표적으로 사용되나 필요에 따라 다른 종류가 사용됨

1.4. 대표적인 고체 배지 만드는 법

평판배지 (plate medium) 

멸균된 petri dish를 바닥이 평평한 곳에 놓고 (가능하면 BioSafety Cabinet or Clean bench) 배지가 든 플라스크의 입구를 불꽃으로 화염 멸균

멸균된 petri dish 뚜껑을 열어 10~15ml 배지를 부어 넣음

배지가 굳을 떄까지 기다림 (오염이 우려되면 petri dish 뚜껑을 닫아야 하나 냉각시 뚜껑에 습기가 찰수 있음. BSC에서 작작업하는 것을 권장함)

사면배지 (slant medium)

시험관에 멸균된 배지가 사면이 되도록 시험관의 1/2 정도 붓고 경사지게 만들어 굳힘 ( 너무 경사지거나 배지량이 많으면 시험관의 입구까지 배지가 도달하여 오염위험성이 있음)

고층배지 (agar deep tube)

시험관에 배지를 1/3 정도 분주

고체배지의 보관은 비닐, 랩 등으로 잘 싸서 냉장 4~8'C에서 보관