Bio process & Life

*질문, 필요하신 정보 댓글이나 방명록에 남기시면 함께 고민해 보겠습니다. 1. 현미경 관찰세균 표본은 일반적으로 잘 보이지 않으므로 염색액으로 염색하거나, 암시야조사법, 위상차현미경을 쓰기도 함세균의 운동을 검사할 때는 홈이 파진 슬라이드글라스를 사용하고, 커버글라스를 덮고 현적표본검사를 함 유침법의 원리유침법을 사용하는 이유는 세균을 높은 배율 (1000배)로 하지 않고는 보이지 않으므로 렌즈가 작아지고 시야가 어두워지기 때문슬라이드글라스의 굴절률과 같은 굴절률의 cedar 오일을 슬라이드글라스와 렌즈 사이에 넣으면 굴절 없이 모든 빛이 대물렌즈 안에 모이게 됨 2. Gram 염색1884년 크리스티앙 그람 (Chistian Gram)이 최초로 개발4가지 시약, 염기성 염료 (crystal violet..

*질문, 필요하신 정보 댓글이나 방명록에 남기시면 함께 고민해 보겠습니다. 1. 배지 조제미생물을 성장, 증식시키기 우해서는 탄소원, 질소원, 무기이온, 아미노산, 비타민과 발육 촉진인자등의 영양성분이 필요미생물은 영양요구성이 균의 종류에 따라 각각 다름 배지 (medium)미생물의 배양에 필요한 각종 영양분을 섞어 인위적으로 만든 혼합물배지의 종류는 다양하나, 배지에 사용되는 소재, 배지의 형태, 배지 사용목적등에 따라 분류 가능 1.1. 소재에 의한 분류천연배지 (natural medium), 복합배지 (complex medium) : 배지의소재가 천연물이며 그 화학조성이 확실히 알려있지 않은 배지. 미생물의 증식, 분리배양에 널리 쓰이고 있음합성배지 (synthetic, defined medium)..

*질문, 필요하신 정보 댓글이나 방명록에 남기시면 함께 고민해 보겠습니다. 1.미생물을 접종할 때 사용하는 기분 기구는 '백금이'나 '백금선' 1.1. 백금선 (Platinum needle 또는 transfer needle)주로 고체배지에서 균을 채취하거나, 천자 배양할 때 접종에 사용 1.2. 백금이 (Platinum loop 또는transfer loop)백금이의 크기와 모양은 배지의 점도와 필요에 따라 조절해 사용액체배지, 고체배지에 균을 채취할 때 사용 1.3. 삼각 유리봉평판 배지에 균체를 골고루 얇게 접종하고자 할 때 사용 2. 균주의 보존 2.1. 균주의 의미균주는 한 종류의 균을 순수배양하여 분리한 균 2.2. 보존방법병원미생물의 경우, 성상의 변화 없이 장기간 보존할 수 있는 방법으로 동결..

*질문, 필요하신 정보 댓글이나 방명록에 남기시면 함께 고민해 보겠습니다. 박테리아 세포를 파쇄하여 세포 용출액(Lysates)를 분리하는 방법에 대해 알아보자. 박테리아세포를 파쇄하는 대표적인 방법은 아래와 같다. 1. Boiling Lysis (끓이는 방법) 2. Sonication (초음파 파쇄기 이용) 3. Lysozyme Digestion (박테리아 용해효소 이용) 4. Repeated Freezing and Thawing (열리고 녹이는 것을 반복는 방법) 5. Homogenisation (Homogeniser를 이용한 균질화) 각 방법에 대해 자세히 알아보자. Boiling Lysis (끓이는 방법) 1. Bacterial cell을 준비한다. 2. Bacterial cell 1mL을 튜브 ..

*질문, 필요하신 정보 댓글이나 방명록에 남기시면 함께 고민해 보겠습니다. 목적: Bacterial cell에서 plasmid DNA를 분리한다. Plasmid는 일반적으로 원형 (circular) 때때로 선형 (linear) dsDNA의 형태를 갖는다. 비필수 유전정보 (non-essential genes)에 해당하며 유전공학에서 운반체 (vectors)로 여겨진다. 형질전환 (transformation)을 통해 Bacterial cell에 도입 될수있다. 기능에 따라 1. fertility F-plasmids 2. resistance R-plasmids 3. Col plasmids 4. degradative plasmids 5. virulence plasmids Plasmid DNA 추출 방법을 살펴..

*질문, 필요하신 정보 댓글이나 방명록에 남기시면 함께 고민해 보겠습니다. 단백질을 보관 실험 할 때 단백질을 안정화 시킬 필요가 있다. 단백질 안정화의 중요성 단백질은 특유의 구조를 지녀 DNA와 달리 활성을 보유 단백질의 분리정제와 보존 과정에서 활성을 유지한 채 높은 회수율(yields)로 얻어내는 것이 대단히 중요 회수율의 저하 (단백질이 갖는 원래 기능이 사라지거나(불활성화), 변성에 의해 녹지 않는 불용화, 용기의 표면 등에 붙어서 단백질 자체가 회수 되지 않는것 등이 원인) 불활성화는 열, 변성제, 극단의 pH, 단백질 분해효소(protease)에 의한 분해 등이 주원인, 구조가 바뀌면서 발생 단백질은 고차구조와 기능이 밀접하게 연결되어 있어 비교적 작은 환경변화에도 구조가 변화 고차구조를 ..

*질문, 필요하신 정보 댓글이나 방명록에 남기시면 함께 고민해 보겠습니다. 포름알데하이드 (Formaldehyde)와 포르말린(Formalin)의 차이를 알아보자. 포르말린은 Formalin 또는 Formaldehyde Solution이라고 한다. 포르말린은 40%(v/v) Formaldehyde 또는 37%(w/w) Formaldehyde 이다. 통상적으로 37%(w/w) Formaldehyde 라고한다. 포르말린을 M 농도를 따지거나 반응에 사용게 된다면 37% Formaldehyde라고 용어를 통일하여 사용하는 것이 혼선이 없다. 포름알데하이드 (Formaldehyde) Properties Chemical formula : CH2O Molar mass : 30.03 g·mol−1 Appearance..

*질문, 필요하신 정보 댓글이나 방명록에 남기시면 함께 고민해 보겠습니다. 완충용액 강산이나 강염기와 같은 외부의 높은 pH 변화에도 완충해 낼 수 있는 용액요구하는 pH에 따른 완충용액의 선택해리상수인 pKa값을 확인하여 결정하는 것이 중요 완충용액 선택 단백질 20개의 아미노산으로 구성아미노산자체가 완충용액 (buffer solution)완충용액의 정확한 제조는 단백질 연구에서 기본 중 기본완충용액의 선택은 단백질 실험의 성패에 중요한 영향 pH 개념, 용액상의 수소이온 농도 pH = -log[H+], (Sorensen) pH = pKa + log [A-]/[HA], 즉 pH는 pKa + log [염]/[비해리 산] 강산이나 강염기가 가하여져도 pH가 쉽게 변하지 않는 용액 '완충용액' 이온계수 (i..

*질문, 필요하신 정보 댓글이나 방명록에 남기시면 함께 고민해 보겠습니다. 세균 (Bacterial cell)에서 Genomic DNA 추출(분리) (gDNA Isolation) 방법과 주요 개념에 대해 알아보자. (사실... membrane 타입의 kit가 잘나와있다.) 실험전 사용시약에 MSDS (material safety data sheet) 확인하고 취급정보 및 주의사항 등 안전을 확보하고 실험해야한다. 실험방법 1. 실험용 세균을 준비한다. (Bacterial cell culture) ex)E.coli OD600 2~3 2. 1.5mL 배양액을 튜브에 담고 원심분리기 (centrifuge) 를 이용하여 펠렛 (pellet)과 상등액 (supernatant)을 분리한다. ex) 6000 rpm,..

*질문, 필요하신 정보 댓글이나 방명록에 남기시면 함께 고민해 보겠습니다. 단백질의 농도를 측정하는 방법은 다양하게 있으며, 생물학적제제 기준 및 시험법에는 마이크로킬달법, Lowry법, Biuret법을 설명하고 있다. 하지만... 단백질 정량법은 상황과 조건에 따라 다양한 방법을 이용 할 수 있다. DC protein assay kit도 있지만. 나중에 소개 하기로하고 이번에는 기초적인 개념만 잡는 것으로. 단백질의 정량법 절대적인 단백질의 농도를 측정하는 방법 종류 UV법, Lowry법, BCA법, Bradford법, 기타 간편한 dye-binding법 등 정량법 선택시 주의사항 단백질 종류에 의한 감도의 차이, 방해물질의 유무와 허용농도, 반응액의 pH 등에 따라 적절한 방법을 선택 필요 정량방법 ..